Comprender mejor el reservorio del virus en el cuerpo

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Los investigadores de LMU han desarrollado un método que permite por primera vez analizar genéticamente en detalle las células inmunes humanas en reposo.

CD4+ Las células T son partes importantes del sistema inmunológico y juegan un papel clave en la defensa del cuerpo contra los patógenos. Debido a que poseen una amplia variedad de mecanismos de defensa contra el VIH en su estado de reposo, rara vez se infectan, pero estas pocas células infectadas forman un reservorio latente para el VIH en el cuerpo que actualmente no pueden alcanzar los medicamentos antivirales. Como resultado, el virus puede propagarse nuevamente desde allí después de la activación de CD4.+ Células T. Entender cómo el VIH interactúa con los CD4 en reposo+ Las células T son fundamentales para encontrar nuevos enfoques terapéuticos. Los científicos dirigidos por el Prof. Oliver T. Keppler del Instituto Max von Pettenkofer de la LMU han desarrollado ahora un método que por primera vez permite manipular genéticamente estas células inmunes específicas en condiciones fisiológicas de manera eficiente y sin complicaciones. Como informan los autores en la revista Métodos de la naturaleza, esto permite conocimientos previamente inalcanzables sobre la biología de estas células.

Descanso CD4+ Las células T eran poco susceptibles a la manipulación genética, porque los métodos disponibles generalmente asumen células en división, explica Keppler. «Y las células en reposo no se dividen por definición». Como primer paso en el desarrollo del nuevo método, el equipo de científicos optimizó las condiciones de cultivo. Como resultado, los investigadores pudieron mantener vivas estas células en el laboratorio después de extraerlas de la sangre de donantes sanos no solo durante 3-4 días como antes, sino hasta por seis semanas. El avance decisivo llegó con un avance en la nucleofección, un método especial que permite administrar reactivos al núcleo de una célula. Usando esta técnica, los investigadores introdujeron las tijeras genéticas CRISPR-Cas en CD4. en reposo+ Células T, lo que les permite realizar cambios específicos en el genoma de las células huésped, por ejemplo, mediante la eliminación de genes mediante los denominados knockouts. «Esta combinación funcionó de manera muy eficiente y pudimos alcanzar y manipular genéticamente alrededor del 98% de las células. Además, lo hicimos sin activar CD4».+ Células T ”, dice Keppler.“ Lo que fue particularmente emocionante fue el hecho de que pudimos eliminar hasta seis genes simultáneamente con alta eficiencia por medio de una sola nucleofección. Nadie había podido hacer esto antes en células primarias y lo hicimos con células aisladas de un órgano intacto «.

En el futuro, los investigadores podrán eliminar genes únicos y vías de señalización completas y analizar sus funciones. Al eliminar los genes correspondientes, ya han logrado dilucidar si cuatro factores celulares previamente controvertidos desempeñan un papel en la infección por VIH o no.

Además de esto, siguieron un segundo enfoque «knock-in», mediante el cual se insertan genes adicionales o ligeramente modificados, como un gen para la proteína verde fluorescente (GFP). Con la ayuda de esta proteína, los investigadores pueden analizar cómo cambia la actividad de un gen objetivo bajo ciertas condiciones, o pueden marcar proteínas específicas. «Todas estas cosas juntas nos dan la oportunidad por primera vez de estudiar la interacción del VIH con los CD4 humanos en reposo.+ Células T en condiciones fisiológicas «, explica Adrian Ruhle, coautor principal del estudio.» Pero también podemos estudiar mejor estas células en su función general como células inmunes más allá del VIH «. A largo plazo, los investigadores esperan que hayan Una mejor comprensión de la biología de estas células conducirá a nuevos enfoques para la eliminación total del VIH del cuerpo de los pacientes, ya que todavía hay aproximadamente 37 millones de personas en todo el mundo infectadas con el virus.

Fuente de la historia:

Materiales proporcionados por Ludwig-Maximilians-Universität München. Nota: El contenido se puede cambiar por estilo y longitud.

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